DNase I溶液（蛋白(bái)提取用）

DNase I Solution（for protein isolation）

●     産品組成：

● 保存：-20℃粉末未配制有效期3年(nián)；DNaseI配制成溶液後-20℃有效期一年(nián)。

● 産品簡介：

脫氧核糖核酸酶Ⅰ(DNaseⅠ)是一種非特異性核酸酶切酶，可(kě)用于降解單鏈或雙鏈DNA，其原理(lǐ)爲DNaseⅠ水解磷酸二酯鍵産生(shēng)帶有5'-磷酸基團和3'-OH的單核苷酸或寡核苷酸。   本産品能迅速水解核酸，降低粘度以減少處理(lǐ)時間和增加蛋白(bái)産量。該酶可(kě)以與細菌蛋白(bái)提取液和RIPA 裂解液等蛋白(bái)抽提試劑配合使用。

本産品RNase活性未檢測，不能用于反轉錄反應（RT-PCR）中DNA的去(qù)除使用。RT-PCR中DNA污染的去(qù)除請(qǐng)選擇RNase-free DNase I（貨号：RTT2014）。

● 活性定義：

One unit of the enzyme completely degrades 1 μg of DNA in 10 min at37°C. 

● DNaseI溶解液組份：

20 mMsodium acetate pH 6.5, containing5 mMCaCl₂ and 0.1 PMSF, 50% (v/v) glycerol

● DNaseI失活或抑制：

加入EDTA至終濃度爲2.5mM後，65℃加熱(rè)10分(fēn)鍾可(kě)使DNase I失活。酚氯仿抽提也可(kě)以使DNase I失活。金屬離(lí)子螯合劑，達到毫摩爾/升濃度的鋅離(lí)子，0.1%的SDS，DTT、巯基乙醇等還(hái)原劑，50-100mM以上鹽濃度均對DNase I有顯著抑制作(zuò)用。

● 使用方法：

 1、DNase I溶液的配制：取5ml DNase I溶解液全部加到DNase I粉末中，充分(fēn)混勻，配成濃度爲2000U/ml DNase I溶液。-20℃貯存。

2、蛋白(bái)提取液中按照(zhào)1/100 體(tǐ)積加入DNase I溶液（使其終濃度爲20U/ml），1/100體(tǐ)積加入1MMgCl₂，37℃處理(lǐ)30-60分(fēn)鍾。

   注：由于EDTA能螯合酶活性需要的Ca²⁺和Mg²⁺，蛋白(bái)初始裂解液中要去(qù)除EDTA，否則會降低DNase的消化能力。

3、繼續後續蛋白(bái)提取實驗。