● 目錄号：RTX302

● 儲存條件(jiàn)：-70℃凍存六個月

● 産品包裝：

● 産品簡介：

本公司生(shēng)産的DH5α感受态細胞采用經特殊工(gōng)藝處理(lǐ)得(de)到，可(kě)用于DNA的化學轉化。使用pUC18質粒檢測，轉化效率可(kě)達10⁸cfu/μg，-70℃保存幾個月轉化效率不發生(shēng)改變。

● DH5α菌株介紹：

基因型：supE44△lacU169（j80 lacZ△M15）hsdR17 recA1 end A1 gyrA96 thi-1 relA1

特點：一種用于鋪制與培養質粒平闆和粘粒平闆的重組缺陷的抑制型菌株。其j80 lacZ△M15基因的産物可(kě)與pUC載體(tǐ)編碼的 b-半乳糖苷酶氨基端實現a互補，可(kě)用于藍白(bái)斑篩選。

● 操作(zuò)方法：（以下操作(zuò)均按無菌條件(jiàn)的标準進行）

1取感受态細胞置于冰浴中，如(rú)需分(fēn)裝可(kě)将剛融化細胞懸液分(fēn)裝到無菌預冷(lěng)的離(lí)心管中，置于冰浴中。一次轉化感受态細胞的建議(yì)用量爲50-100 μl，可(kě)以根據實際情況分(fēn)裝使用。應注意所用DNA體(tǐ)積不要超過感受态細胞懸液體(tǐ)積的十分(fēn)之一。

以下實驗以100 μl感受态細胞爲例。

2   向感受态細胞懸液中加入目的DNA（100 μl的感受态細胞能夠被1 ng超螺旋質粒DNA所飽和），輕輕旋轉離(lí)心管以混勻内容物，在冰浴中靜(jìng)置30分(fēn)鍾。

3   将離(lí)心管置于42℃水浴中放(fàng)置45-90秒，然後快(kuài)速将管轉移到冰浴中，使細胞冷(lěng)卻2-3分(fēn)鍾，該過程不要搖動離(lí)心管。

4   向每個離(lí)心管中加入500 μl 無菌的SOC或LB培養基（不含抗生(shēng)素）， 混勻後置于37℃搖床振蕩培養45分(fēn)鍾（150轉/分(fēn)鍾），目的是使質粒上相(xiàng)關的抗性标記基因表達，使菌體(tǐ)複蘇。

5将離(lí)心管内容物混勻，吸取100 μl已轉化的感受态細胞加到含相(xiàng)應抗生(shēng)素的SOB或LB固體(tǐ)瓊脂培養基上，用無菌的彎頭玻棒輕輕的将細胞均勻塗開。将平闆置于室溫直至液體(tǐ)被吸收，倒置平闆，37℃培養12-16小時。

注：塗布用量可(kě)根據具體(tǐ)實驗來(lái)調整。如(rú)轉化的DNA總量較多，可(kě)取更少量轉化産物塗布平闆；反之，如(rú)轉化的DNA總量較少，可(kě)取200-300 μl轉化産物塗布平闆。如(rú)果預計(jì)的克隆較少，可(kě)通過離(lí)心（4,000 rpm, 2分(fēn)鍾）後吸除部分(fēn)培養液，懸浮菌體(tǐ)後将其塗布于一個平闆中。（塗布剩餘的菌液可(kě)置于4℃保存，如(rú)果次日(rì)的轉化菌落數過少可(kě)以将剩下的菌液再塗布新的培養闆）

注意事(shì)項：

1. 感受态細胞應保存在-70℃，不可(kě)多次凍融和放(fàng)置時間過長，以避免感受态細胞的轉化效率。

2. 進行轉化操作(zuò)時，應根據相(xiàng)應溫度及無菌條件(jiàn)的要求進行。

3. 爲防止轉化實驗不成功，可(kě)以保留部分(fēn)連接反應液，以重新轉化，将損失降到最低。