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SYBR Green核酸染料(10000× in DMSO,電泳級)
● 産品規格:
産品編号
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産品名稱
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包裝
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SY001
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SYBR
Green核酸染料 (10000× in DMSO,電泳級)
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50
μl
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-
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說(shuō)明書(shū)
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一份
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● 簡介:
SYBR Green是高靈敏的DNA熒光(guāng)染料,适用于各種電泳分(fēn)析,操作(zuò)簡單,至少可(kě)檢出20 pg DNA,高于EB染色法25-100倍。SYBR Green 與dsDNA 結合熒光(guāng)信号會增強800-1000倍,用SYBR Green染色的凝膠樣品熒光(guāng)信号強,背景信号低,可(kě)适用于多種電泳分(fēn)析。
SYBR Green适合于多種凝膠電泳方法:瓊脂糖凝膠,聚丙烯酰胺凝膠電泳,脈沖電場凝膠電泳以及毛細管電泳等。SYBR Green與雙鏈DNA的親和力非常高,因此可(kě)以用做電泳前染色,對分(fēn)子生(shēng)物學中常用的酶(如(rú):Taq 酶、逆轉錄酶、内切酶、T4連接酶等)沒有抑制作(zuò)用。另外,SYBR Green與EB相(xiàng)比,誘變能力大(dà)大(dà)降低。
● 貯存:4℃,避光(guāng)保存。
● SYBR
Green使用方法:
注意:染料使用前應在室溫下徹底融化混勻後使用。
SYBR Green後染方法(推薦方法)
1. 制作(zuò)不含染料的凝膠,按照(zhào)常規方法進行電泳。
2. 用pH 7.0 - 8.5 的緩沖液(如(rú):TAE,TBE 或 TE),按照(zhào)10000:1的比例稀釋SYBR Green濃縮液(如(rú)50ml 1×TAE中加入5μl 染料),混勻,制成染色溶液。
3. 将染色溶液倒入合适的聚丙烯容器中,放(fàng)入凝膠,用鋁箔蓋住容器使染料避光(guāng)。室溫振蕩染色10-30分(fēn)鍾,染色時間因凝膠濃度和厚度而定。聚丙烯酰胺凝膠直接在玻璃平皿上染色,将配好的工(gōng)作(zuò)溶液輕輕地倒在膠闆上,讓工(gōng)作(zuò)液均勻地覆蓋整個膠闆,并染色30分(fēn)鍾。玻璃平皿必須預先經過矽烷化溶液處理(lǐ)(避免染料吸附在玻璃表面上)。
4. 紫外燈下觀測。
SYBR Green預染方法
1. 制膠:按常規方法制備凝膠,凝膠溫度降至60℃左右時加入10000×SYBR,使染料終濃度爲1×,如(rú)40ml凝膠溶液中加入4μl染料。
2. 上樣、電泳後紫外燈下觀察。
● SYBR Green使用注意事(shì)項
1.後染方法是推薦方法,能得(de)到更好的電泳結果;由于SYBR對樣品過量非常敏感,預染方法容易出現條帶扭曲變形(建議(yì)泳道中每條帶的含量不要超過5ng),請(qǐng)根據實際情況摸索出适合自(zì)己的實驗程序,
2. SRBR對電泳緩沖液的pH要求嚴格,有效pH爲7.5-8.0,電泳時盡量使用新鮮配制的緩沖液,并保證合适的pH範圍。
3. SYBR Green 對玻璃和非聚丙烯材料具有一定親合力。建議(yì)在稀釋、貯存、染色等使用過程中用聚丙烯類容器。
4. 使用酒精沉澱核酸中,SYBR Green可(kě)以全部從(cóng)雙鏈核酸上去(qù)掉。
5. 如(rú)果想對用 SYBR Green染過的膠進行 Southern blot,建議(yì)在預雜交和雜交溶液中加入 0.1%- 0.3% 的SDS,可(kě)以有效去(qù)除SYBR。