10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)
産品編号
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産品名稱
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規格
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TA5030P
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)
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500 ml
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● 簡介:
10×Tris-醋酸轉膜緩沖液是專門(mén)用于Tris-醋酸系統分(fēn)離(lí)高分(fēn)子量蛋白(bái)後轉膜的緩沖液。建議(yì)用于Western時濕轉轉膜,爲方便客戶使用,10×轉膜緩沖液中沒有添加甲醇和SDS,客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。
● 保存、運輸和貯存:
常溫保存,有效期兩年(nián)。
配成溶液後建議(yì)4℃保存,有效期6個月。
1×即用型轉膜緩沖液建議(yì)現用現配,不建議(yì)保存。
● 轉膜緩沖液配制:
1. 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)配制:
原料
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)500 ml
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)
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取TA5030P全部粉末溶于500 ml超純水中,即配制成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)
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2. 1×即用型Tris-醋酸轉膜緩沖液配制:
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1×即用型轉膜緩沖液 配制量 1升
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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)
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100
ml
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變性蛋白(bái)
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非變性蛋白(bái)
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<20 kD蛋白(bái)
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無水甲醇
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20%
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5-10%
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SDS
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0.01%
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0.01%
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20-80 kD蛋白(bái)
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無水甲醇
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10%
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0-5%
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SDS
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0.05%
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0.05%
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>80 kD蛋白(bái)
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無水甲醇
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10%(NC膜)
0-5%(PVDF膜)
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0%
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SDS
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0.1%
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0.1%
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超純水
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定容至1升,不要調節pH,pH~7.2
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注:甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作(zuò)用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上,而SDS讓蛋白(bái)更加離(lí)開膜。因此對大(dà)蛋白(bái)轉膜來(lái)說(shuō),多加SDS,少加甲醇;而對小蛋白(bái)轉膜,多加甲醇,少加SDS。
● 轉膜:
1. 膜的選擇:轉膜可(kě)以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大(dà)小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái),大(dà)于20 kD蛋白(bái)選擇0.45
μm孔徑,低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。
蛋白(bái)轉膜三明治制作(zuò):
負極(電轉夾黑(hēi)色面)-海綿墊-1層1
mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1
mm厚度濾紙-海綿墊-正極(電轉夾白(bái)色面)
3. 轉膜條件(jiàn):
以下轉膜條件(jiàn)僅供參考,客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái),最好經過1-2次預實驗後,确定最佳的轉膜條件(jiàn)。
膜孔徑
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蛋白(bái)大(dà)小
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穩流
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建議(yì)時間
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降溫措施
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0.22 μm
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低于20 kD
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200 mA
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~30分(fēn)鍾
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不需要
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0.45 μm
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20-50 kD
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300 mA
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~45分(fēn)鍾
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需要
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0.45 μm
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50-200 kD
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350 mA
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~50分(fēn)鍾
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需要
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0.45 μm
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高于200
kD
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350 mA
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~2.5-4.5小時
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需要
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