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10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)

産品編号:TA5030P

産品規格:500ml

數量
價格 ¥300

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)

産品編号

産品名稱

規格

TA5030P

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)

500 ml

簡介

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液是專門(mén)用于Tris-醋酸系統分(fēn)離(lí)高分(fēn)子量蛋白(bái)後轉膜的緩沖液。建議(yì)用于Western時濕轉轉膜,爲方便客戶使用,10×轉膜緩沖液中沒有添加甲醇和SDS,客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。

保存、運輸和貯存

常溫保存,有效期兩年(nián)。

配成溶液後建議(yì)4℃保存,有效期6個月。

1×即用型轉膜緩沖液建議(yì)現用現配,不建議(yì)保存。

● 轉膜緩沖液配制:

1.  10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)配制:

原料

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)500 ml

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(濕轉,粉末型)

TA5030P全部粉末溶于500 ml超純水中,即配制成500 ml 10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)

2.  1×即用型Tris-醋酸轉膜緩沖液配制:

 

 

即用型轉膜緩沖液 配制量 1

 

10×Tris-醋酸轉膜緩沖液(溶液型)

100 ml

 

 

變性蛋白(bái)

非變性蛋白(bái)

20 kD蛋白(bái)

無水甲醇

20%

5-10%

SDS

0.01%

0.01%

20-80 kD蛋白(bái)

無水甲醇

10%

0-5%

SDS

0.05%

0.05%

80 kD蛋白(bái)

無水甲醇

10%NC膜)

0-5%PVDF膜)

0%

SDS

0.1%

0.1%

 

超純水

定容至1升,不要調節pHpH~7.2

注:甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作(zuò)用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上,而SDS讓蛋白(bái)更加離(lí)開膜。因此對大(dà)蛋白(bái)轉膜來(lái)說(shuō),多加SDS,少加甲醇;而對小蛋白(bái)轉膜,多加甲醇,少加SDS。

轉膜:

1. 膜的選擇:轉膜可(kě)以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大(dà)小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái),大(dà)于20 kD蛋白(bái)選擇0.45 μm孔徑,低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。


蛋白(bái)轉膜三明治制作(zuò):

負極(電轉夾黑(hēi)色面)-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙-海綿墊-正極(電轉夾白(bái)色面)

3. 轉膜條件(jiàn):

以下轉膜條件(jiàn)僅供參考,客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái),最好經過1-2次預實驗後,确定最佳的轉膜條件(jiàn)。

膜孔徑

蛋白(bái)大(dà)小

穩流

建議(yì)時間

降溫措施

0.22 μm

低于20 kD

200 mA

~30分(fēn)鍾

不需要

0.45 μm

20-50 kD

300 mA

~45分(fēn)鍾

需要

0.45 μm

50-200 kD

350 mA

~50分(fēn)鍾

需要

0.45 μm

高于200 kD

350 mA

~2.5-4.5小時

需要

 


 
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