1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）

● 簡介：

1×Western濕轉轉膜緩沖液（粉末型）可(kě)以用于Western時濕轉轉膜，原始配方是  Towbin buffer（1×）(Towbin et al. PNAS 1979，76:4350-4): 25 mM Tris, 192 mM glycine, 10-20 % 甲醇, SDS 0.01-0.1 %，pH ~8.3。爲方便客戶使用，1×轉膜緩沖液（粉末型）中沒有添加甲醇和SDS，客戶根據需要配制1×轉膜緩沖液時自(zì)行添加。

● 保存、運輸和貯存：

常溫保存，有效期兩年(nián)。配成溶液後建議(yì)4℃保存，有效期6個月。

加入甲醇或/和SDS的1×即用型轉膜緩沖液建議(yì)現用現配，不建議(yì)保存。

● 1×即用型轉膜緩沖液配制方法：

注：甲醇和SDS在轉膜中有拮抗作(zuò)用。甲醇使蛋白(bái)更加結合在膜上，而SDS讓蛋白(bái)更加離(lí)開膜。因此對大(dà)蛋白(bái)轉膜來(lái)說(shuō)，多加SDS，少加甲醇；而對小蛋白(bái)轉膜，多加甲醇，少加SDS。

● 轉膜：

1. 膜的選擇：轉膜可(kě)以選擇PVDF膜或NC膜。根據蛋白(bái)大(dà)小選擇膜的孔徑。一般說(shuō)來(lái)，大(dà)于20 kD蛋白(bái)選擇0.45 μm孔徑，低于20 kD選擇0.22 μm孔徑。PVDF膜使用前要用無水甲醇潤濕活化。

蛋白(bái)轉膜三明治制作(zuò)：

負極（電轉夾黑(hēi)色面）-海綿墊-1層1 mm厚度濾紙-凝膠-膜-1層1 mm厚度濾紙-海綿墊-正極（電轉夾白(bái)色面）

3. 轉膜條件(jiàn)：

以下轉膜條件(jiàn)僅供參考，客戶針對自(zì)己的目的蛋白(bái)，最好經過1-2次預實驗後，确定最佳的轉膜條件(jiàn)。