Western blot的洗液TBST是實驗室常用的配制液體(tǐ)，對于TBST的配方也基本上相(xiàng)差不多，其中配方中就(jiù)有一種組分(fēn)是Tween-20，一種黃(huáng)色或琥珀色澄明的油狀液體(tǐ)，具有特殊的臭氣和微弱苦味。用移液槍吸取時會有一種滞後感。爲什麽在Western blot的洗液TBST中要加入這麽一種試劑，Tween-20在Western blot 中在發揮什麽樣的作(zuò)用呢(ne)？

1、Tween-20

首先了解一下什麽是Tween-20。Tween-20也寫作(zuò)Tween 20，也稱Polyethylene glycol sorbitan monolaurate，中文名爲吐溫-20或吐溫20。Tween-20爲黃(huáng)色或琥珀色澄明的油狀液體(tǐ)，具有特殊的臭氣和微弱苦味。分(fēn)子中含有較多的親水性基團，可(kě)與水、甲醇、乙醇、異丙醇、丙二醇、乙二醇、棉子油等混溶。是常用的非離(lí)子性去(qù)垢劑。

2、Tween-20的應用

Tween-20是一種非離(lí)子型表面活性劑。用途爲水包油乳化劑、可(kě)用作(zuò)溶劑、擴散劑、穩定劑、潤滑劑和抗靜(jìng)電劑等。氣相(xiàng)色譜固定液(最高使用溫度120℃)分(fēn)離(lí)分(fēn)析揮發油、脂肪酸酯、醇、酮和鹵化物。

3、Tween-20作(zuò)用

Western blot的操作(zuò)流程中大(dà)部分(fēn)都(dōu)用到TBST洗液，而且還(hái)是封閉，一抗二抗孵育這種比較關鍵的步驟。通常Tween-20作(zuò)爲一種非離(lí)子型表面活性劑，效果和SDS、BSA作(zuò)用差不多，主要是封閉膜上蛋白(bái)的非結合位點，以降低背景，增強抗體(tǐ)的特異性結合。理(lǐ)想的封閉劑應該封閉所有未結合位點而不替換膜上的靶蛋白(bái)、不結合靶蛋白(bái)的表位、也不與抗體(tǐ)或檢測試劑有交叉反應。如(rú)果脫脂牛奶封閉效果不好可(kě)以提高吐溫濃度。

在WB洗液裡(lǐ)的吐溫是和BSA一樣，對抗原抗體(tǐ)蛋白(bái)提供保護作(zuò)用，同時因爲是表面活性劑（司盤加成親水的環氧乙烷基團後的化合物），可(kě)以減少抗體(tǐ)對抗原的非特異性作(zuò)用，用于洗脫未結合的抗體(tǐ)、減少非特異性結合。Tween-20是我們用TBST的時候Tween-20得(de)用量是0.5ml/L，不加SDS。