電泳還(hái)原與非還(hái)原區别

電泳還(hái)原與非還(hái)原區别

聚丙烯酰胺凝膠（PAGE）爲網狀結構，具有分(fēn)子篩效應，它有兩種形式：非變性電泳（Native-PAGE）和變性電泳（SDS-PAGE）。非變性電泳，在電泳的過程中，蛋白(bái)質能夠保持完整狀态，并依據蛋白(bái)質的分(fēn)子量大(dà)小、形狀及其所附帶的電荷量而逐漸呈梯度分(fēn)開；而變性電泳（SDS-PAGE）僅根據蛋白(bái)質亞基分(fēn)子量的不同分(fēn)開蛋白(bái)質（可(kě)以忽略電荷因素）。SDS是陰離(lí)子去(qù)污劑，作(zuò)爲變性劑和助溶試劑，它能斷裂分(fēn)子内和分(fēn)子間的氫鍵，使分(fēn)子去(qù)折疊，破壞蛋白(bái)分(fēn)子的二、三級結構。

強還(hái)原劑，如(rú)巯基乙醇、二硫蘇糖醇（DTT）能使半胱氨酸殘基間的二硫鍵斷裂。有些蛋白(bái)含有二聚體(tǐ)或多聚體(tǐ)，如(rú)果加入β-巯基乙醇，它會還(hái)原多聚蛋白(bái)之間和内部的二硫鍵，這樣，電泳的樣品将會被完全還(hái)原成單體(tǐ)甚至亞基形式，不加還(hái)原劑的樣品則會保持聚體(tǐ)的形式。

SDS-PAGE有非還(hái)原SDS-PAGE和還(hái)原SDS-PAGE之分(fēn)，均是變性條件(jiàn)下的電泳。非還(hái)原與還(hái)原的區别是在樣品處理(lǐ)時是否加入還(hái)原劑（如(rú)β-巯基乙醇或DTT等）。

在進行電泳方法選擇時，首先要明确目标蛋白(bái)的結構特點，以及電泳目的預期，來(lái)決定是否需加入還(hái)原劑。

如(rú)需測定目标蛋白(bái)的純度及分(fēn)子量（爲多聚體(tǐ)分(fēn)子量），則一般采用非還(hái)原SDS-PAGE：采用該電泳方法，二聚體(tǐ)、多聚體(tǐ)在凝膠中的位置會處于單體(tǐ)分(fēn)子量2倍或多倍的位置，利于觀察及各組分(fēn)的定性定量分(fēn)析。當然這種蛋白(bái)的聚體(tǐ)形成是依靠二硫鍵來(lái)維持的。

如(rú)果僅需測定蛋白(bái)質亞基結構的分(fēn)子量，則需采用還(hái)原SDS-PAGE，将二聚體(tǐ)、多聚體(tǐ)降解爲單體(tǐ)，理(lǐ)想情況下，若還(hái)原充分(fēn)，僅可(kě)見(jiàn)亞基條帶。