細胞增殖-毒性檢測試劑盒
Cell Counting Kit-8(CCK-8)
● 産品組成:
組分(fēn)貨号
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名稱
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規格
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貯存
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CK0115-01
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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1 ml(100次)
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4℃,避光(guāng)保存
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CK0115-02
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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5×1
ml(500次)
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4℃,避光(guāng)保存
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CK0115-03
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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25 ml(2500次)
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4℃,避光(guāng)保存
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CK0115-04
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Cell Counting
Kit-8(CCK-8)
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100 ml(10000次)
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4℃,避光(guāng)保存
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● 産品簡介:
CCK-8試劑盒,是一種基于WST-8的廣泛應用于細胞增殖和細胞毒性的快(kuài)速高靈敏度檢測試劑盒。 WST-8是一種類似于 MTT的化合物,在電子耦合試劑1-Methoxy PMS存在的情況下,可(kě)以被還(hái)原生(shēng)成橙黃(huáng)色水溶性的甲臜(Formazan)。細胞增殖越多越快(kuài),則顔色越深;細胞毒性越大(dà),則顔色越淺。對于同樣的細胞,顔色的深淺和細胞數目呈線性關系。
WST-8與傳統的MTT,XTT,MTS,WST-1相(xiàng)比有明顯的優點。首先,反應生(shēng)成的formazan是水溶性的,可(kě)以省去(qù)後續的溶解步驟。其次,WST-8更加穩定,檢測線性範圍更寬,靈敏度更高。
本試劑盒可(kě)以用于細胞因子等誘導的細胞增殖檢測,也可(kě)以用于抗癌藥物等對細胞有毒試劑誘導的細胞毒性檢測,或一些藥物誘導的細胞生(shēng)長抑制檢測。
本試劑盒檢測便捷,使用方便。僅含一管已經配制好的含有WST-8的CCK-8溶液,無須再進行任何配制等操作(zuò)。無須使用同位素,所有的檢測步驟僅在同一塊96孔闆内完成。不必洗滌細胞,不必收集細胞,也不必采用額外的步驟去(qù)溶解甲臜。特别适用于大(dà)批量樣品的檢測。
另外,酚紅(hóng)和血清對本試劑盒的測定無明顯影(yǐng)響。
WST-8對細胞無明顯毒性。加入CCK-8溶液顯色後,可(kě)以在不同時間反複用酶标儀讀(dú)闆,使檢測時間更加靈活,便于找到最佳測定時間。
本試劑盒可(kě)以測定100個或500個樣品。
● 保存條件(jiàn):
CCK-8 溶液在避光(guāng),0-5℃的條件(jiàn)下可(kě)以保存一年(nián),如(rú)長期保存,可(kě)在-20℃下保存 2 年(nián),如(rú)需經常使用請(qǐng)将試劑存放(fàng)在 0-5℃,爲防止背景值增加幹擾實驗結果,請(qǐng)勿反複凍融。
● 操作(zuò)步驟:
1. 在 96孔闆中接種細胞懸液(100 μl /孔),通常細胞增殖實驗每孔約2000 個細胞,細胞毒
性實驗每孔約5000 個細胞,具體(tǐ)每孔所用的細胞的數目,需根據細胞的大(dà)小,細胞增殖速度的快(kuài)慢(màn)等因素決定)。
2. 按照(zhào)實驗需要,進行培養并給予0-10 μl特定的藥物刺激,處理(lǐ)一段适當的時間(例如(rú): 6,12,
24或48小時)。
3. 每孔加入10 μl CCK-8 溶液。如(rú)果起始的培養體(tǐ)積爲200 μl,則需加入20 μl CCK-8溶液,以此類推。可(kě)以用加相(xiàng)應量細胞培養基和 CCK-8但(dàn)不加細胞的孔作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào),若擔心所使用的藥物會幹擾檢測,需設置加相(xiàng)應量細胞培養液、藥物和 CCK-8 溶液但(dàn)不加細胞的孔作(zuò)爲空白(bái)對照(zhào)。
4. 在細胞培養箱内繼續孵育1-4小時,具體(tǐ)時間可(kě)以通過預實驗确定。預實驗時可(kě)以在0.5、
2和4 小時後分(fēn)别用酶标儀檢測,然後選取吸光(guāng)度範圍比較适宜的一個時間點用于後續實驗。
5. 用酶标儀測定在450 nm處的吸光(guāng)值,若無450nm濾光(guāng)片,可(kě)以使用420-480nm 的濾光(guāng)
片。如(rú)果樣品爲高渾濁度的細胞懸液,可(kě)以使用大(dà)于 600nm的波長,例如(rú)650nm,作(zuò)爲參考波長進行雙波長測定。
6. 如(rú)果需要暫時不測定 OD值,可(kě)以向每孔中加入10 μl0.1MHCl 溶液或者1%(w/v)的 SDS溶液,避光(guāng)保存在室溫,24 小時内吸光(guāng)度不會發生(shēng)變化。
● 注意事(shì)項:
1. 使用96 孔闆進行檢測時,如(rú)果細胞培養時間較長,請(qǐng)注意蒸發問(wèn)題。可(kě)将96 孔闆外圍一圈加培養基、水或 PBS保濕。同時,可(kě)以把96孔闆置于培養箱内靠近水盤的位置以緩解蒸發。
2. 培養時間根據細胞種類的不同和每孔内細胞數量的多少而不同。在正式實驗前,建議(yì)先做預實驗摸索鋪闆的細胞數量以及加入CCK-8 試劑後的培養時間。
3. 鋪闆時請(qǐng)注意保證每個孔細胞數量均勻,建議(yì)鋪闆過程中注意時常混勻,防止因細胞沉澱造成不均勻。加入CCK-8 後請(qǐng)前後左右輕輕晃動培養闆數次,使培養基和CCK-8 溶液充分(fēn)混勻。
4. 本試劑盒的檢測依賴于脫氫酶催化的反應,如(rú)果待測物質有氧化性或還(hái)原性,可(kě)在加CCK-8 之前更換新鮮培養基,去(qù)掉藥物的影(yǐng)響。若藥物影(yǐng)響比較小的情況可(kě)以不更換培養基,直接扣除培養基中加入藥物後的空白(bái)吸收即可(kě)。
5. 加入CCK-8 時,如(rú)果細胞培養時間較長,培養基顔色或 pH值已變化,建議(yì)換用新鮮的培養基。
6. 用酶标儀檢測前需确保每個孔内沒有氣泡,否則會幹擾測定。
7. 本試劑盒系無菌灌裝生(shēng)産。在使用過程中,請(qǐng)在生(shēng)物安全櫃内無菌操作(zuò),避免污染。
CCK-8
使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:
1. [2022 IF=2.6] Upregulation of
Protease-Activated Receptor 2 Promotes Proliferation and Migration of Human
Vascular Smooth Muscle Cells (VSMCs).
Author: Mei Wei, Yongsheng Liu, Mingqi Zheng, Le Wang, Fangfang
Ma, Yanchao Qi, Gang Liu
Journal: Medicine Science Monotor. 2019; 25:
8854-8862
Institution:The First Hospital of Hebei Medical
University
Paper link:https://www.medscimonit.com/abstract/index/idArt/917865