Real Taq DNA Polymerase
● 儲存條件(jiàn):-20℃ 保存
● 濃 度: 5 U/ml
● 産品簡介
Real Taq
DNA Polymerase是從(cóng)克隆有Thermu aquaticus DNA Polymerase基因的大(dà)腸杆菌經誘導表達後分(fēn)離(lí)純化的，其分(fēn)子量爲94 KD。具有5’-3’DNA聚合酶活性和5’-3’外切核酸酶活性，無3’-5’外切酶活性。在PCR反應中，Real Taq DNA Polymerase延伸速度爲1-2 kb/分(fēn)鍾，産物3’端帶A，可(kě)直接用TA載體(tǐ)克隆。
● 活性定義
1單位(U) Real Taq DNA Polymerase活力定義爲在74℃、30分(fēn)鍾内，以活性化的大(dà)馬哈魚精子DNA作(zuò)爲模闆/引物，将10 nmol脫氧核苷酸摻入到酸不溶物質所需的酶量。
● 酶貯存緩沖液
20 mM Tris-HCl (pH 8.0);0.1 mMEDTA;1 mMDTT;100 mMKCl ; Stabilizers; 50% glycerol
● 10×Taq Buffer
200
mM Tris-HCl (pH 8.4);200
mMKCl;15 mMMgCl2; 其它成分(fēn)。
● 适用範圍
一般用于DNA片段的PCR擴增、DNA标記、引物延伸、序列測定、平末端加A等，産物可(kě)以直接用于T/A載體(tǐ)克隆。
● 反應舉例：
注意：以下舉例爲常規PCR反應系統，僅供參考。實際反應條件(jiàn)因模闆、引物等的結構不同而各異，需根據模闆、目的片段的大(dà)小、堿基序列和引物長短(duǎn)等具體(tǐ)情況，設定最佳反應條件(jiàn)。
以人(rén)基因組DNA爲模闆，擴增1 kb的片段
1. 反應體(tǐ)系的建立：50 ml反應體(tǐ)系如(rú)下(可(kě)根據比例放(fàng)大(dà)或縮小反應體(tǐ)系)：
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Template
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<1mg
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Primer
1（10 mM）
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1 ml
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Primer
2（10 mM）
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1 ml
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10×Taq Buffer
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5 ml
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dNTP
Mixture(10 mM)
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1 ml
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Taq
(5 U/ml)
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0.5 ml
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ddH2O
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補至 50 ml
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2. PCR反應循環的設置：
94℃ 3 min
94℃ 30 sec
55℃ 30 sec 30
cycles
72℃ 1 min
72℃ 5 min
3. 結果檢測：反應結束後取5 ml反應産物，瓊脂糖凝膠電泳檢測。