超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒(貨号:RTD6120)
● 産品組成:
組分(fēn)貨号
|
組分(fēn)
|
名稱
|
規格
|
貯存
|
運輸
|
RTD6120-01
|
組分(fēn)1
|
2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
RTD6120-02
|
組分(fēn)2
|
2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液
|
30 ml
|
4℃
|
常溫
|
RTD6120-03
|
組分(fēn)3
|
2×PAA溶液 超低濃縮膠用
|
15 ml
|
4℃
|
常溫
|
RTD6120-04
|
組分(fēn)4
|
2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用
|
30 ml
|
4℃
|
常溫
|
AP020P
|
組分(fēn)5
|
10% APS(幹粉)
|
5 ml
|
常溫
|
常溫
|
TA0761-01
|
組分(fēn)6
|
TEMED
|
0.5 ml
|
常溫
|
常溫
|
CB010P
|
組分(fēn)7
|
10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)
|
500 ml(幹粉)
|
常溫
|
常溫
|
TP050
|
組分(fēn)8
|
2×Tricine 上樣緩沖液(含還(hái)原劑)
|
1 ml
|
-20℃
|
常溫
|
RTD6202-02
|
組分(fēn)9
|
FastBlue蛋白(bái)染色液
|
500 ml
|
常溫
|
常溫
|
● 産品簡介:
本試劑盒含有超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳(多肽電泳)全套試劑,可(kě)以用來(lái)檢測1-20kd的多肽大(dà)小。本試劑盒可(kě)配制至少10塊常規大(dà)小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:
1 适用範圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,适用于多肽的變性和非變性電泳。
2 分(fēn)辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可(kě)以有效分(fēn)離(lí)1-5kD多肽。
3 穩定性高:凝膠緩沖液pH爲中性,存放(fàng)時間長。
4 使用方便:配制凝膠時隻需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可(kě)配制凝膠。
● 貯存和效期:
按照(zhào)标簽溫度貯存;開封後有效期一年(nián)。
● 使用說(shuō)明:
一. 10% APS配制:
10% APS配制-5 ml:将APS幹粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解後分(fēn)裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放(fàng)時間,以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。
二. 制膠:
I 配制分(fēn)離(lí)膠
1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。
表一 (一塊1 mm mini膠用量)*
|
分(fēn)離(lí)膠
|
濃縮膠
|
|
18%T /5 ml
|
5%T /2 ml
|
2×多肽電泳濃縮膠緩沖液
|
/
|
1 ml
|
2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液
|
2.5 ml
|
/
|
2×PAA溶液 超低濃縮膠用
|
/
|
1 ml
|
2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用
|
2.5 ml
|
/
|
10%APS
|
25-50 μl**
|
20-30 μl
|
TEMED
|
2.5-5 μl
|
2 μl
|
注: * 如(rú)非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會減少電泳後染色和脫色的時間。
** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快(kuài);冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可(kě)以根據表二的标準條件(jiàn)調節催化劑的加入量。
表二 超低凝膠制備凝固時間表
環境溫度
|
20℃
|
25℃
|
|
分(fēn)離(lí)膠配制
|
濃縮膠配制
|
分(fēn)離(lí)膠配制
|
濃縮膠配制
|
分(fēn)離(lí)膠配制量
|
5 ml
|
-
|
5 ml
|
-
|
濃縮膠配制量
|
-
|
2 ml
|
-
|
2 ml
|
10%APS
|
50 μl
|
20 μl
|
25 μl
|
20 μl
|
TEMED
|
5 μl
|
2 μl
|
2.5 μl
|
2 μl
|
凝固時間
|
5-10 分(fēn)鍾
|
20-30 分(fēn)鍾
|
5-10 分(fēn)鍾
|
20-30 分(fēn)鍾
|
2.在凝膠模具中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液,然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。
3.靜(jìng)置5-10分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
II 配制濃縮膠
去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層,用濾紙将殘留的水吸去(qù)。
1.按照(zhào)表一将不同成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。
2.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。
3.靜(jìng)置20-30分(fēn)鍾待凝膠聚合
三. 電泳:
1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:
将10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat No:CB010P)置于一幹淨的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。
表三 1×TTS緩沖液配制
|
1×TTS配制量 500 ml
|
1×TTS配制量 1000 ml
|
10×TTS
|
50 ml
|
100 ml
|
超純水
|
450 ml
|
900 ml
|
注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。
2. 樣品處理(lǐ):
待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]等體(tǐ)積混合,75℃處理(lǐ)5-10分(fēn)鍾後上樣。蛋白(bái)Marker一般已經含有上樣緩沖液,根據說(shuō)明書(shū)上樣(預染Marker不能加熱(rè)處理(lǐ),非預染Marker上樣前一般要75℃處理(lǐ)5-10分(fēn)鍾)。
将電泳槽的内槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗幹淨,将Marker或蛋白(bái)樣品(已經過處理(lǐ))加入點樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分(fēn)離(lí)膠下沿位置時即可(kě)停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2.5-3個小時。
表四 多肽電泳條件(jiàn)
恒電壓
|
150V
|
起始電流
|
60-75mA/闆膠
|
結束電流
|
15-25mA/闆膠
|
電泳時間
|
2.5-3小時
|
四. 染色(使用組分(fēn)9-FastBlue蛋白(bái)染色液):
● 用前必讀(dú):
1 使用前如(rú)發現瓶中有少許沉澱,請(qǐng)混勻後使用。
2以下“使用方法”是針對0.75mm和1.0
mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。
● 使用方法:
1. 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中,加入适量染色液(以剛剛覆蓋過膠面爲适),條帶1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。
2. 搖床上常溫搖動10-15分(fēn)鍾。
3. 觀察結果。
● 注意事(shì)項:
1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如(rú)果使用更大(dà)面積或更厚的凝膠,請(qǐng)加入更多的染色液并延長染色的時間。
2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都(dōu)無必要。
3. 本染色液可(kě)以重複利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請(qǐng)延長染色時間。
4.
本染色液有輕微腐蝕性,請(qǐng)帶手套操作(zuò)。使用後,請(qǐng)蓋好瓶蓋,常溫密封保存。
緩沖液配方:
1.
10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1
L) (Cat No:CB010P)
組分(fēn)濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS
Tris
base 121.1 g
Tricine 179.2 g
SDS 10 g
ddH2O to1 L
Do not
adjust the pH (~pH 8.3)
2. 2×Tricine蛋白(bái)樣品加樣緩沖液(10ml) (Cat No:TP050)
組分(fēn)濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250
1ml 1MTris-Cl pH6.8
2.4ml 甘油
0.8g SDS
0.31gDTT
2mg 考馬斯亮藍G-250
用滅菌ddH2O定容至10ml
混勻分(fēn)裝-20℃貯存備用
多肽電泳配套試劑
使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:
1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer
for Purification of ε-Poly-L-Lysine.
Product:RTD6120 超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒
Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.
Journal: Appl Biochem
Biotechnol. May 20 2017.
Institution:East
ChinaUniversity of Science and Technology
Paper link: https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3
2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of
Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified
Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption
ionization-time of flight mass spectrometry.
Product:RTD6120 超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒;RTD6110 彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)Marker
Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang
Journal: Analytical
Methods 2021,13,2804
Institution: Department of Chemistry, Fudan
University,
Paper link:https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/