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超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒

超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒

産品編号:RTD6120

産品規格:10次

數量
價格 ¥1000

超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒(貨号:RTD6120)

●     産品組成:

組分(fēn)貨号

組分(fēn)

名稱

規格

貯存

運輸

RTD6120-01

組分(fēn)1

2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

15 ml

4

常溫

RTD6120-02

組分(fēn)2

2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液

30 ml

4

常溫

RTD6120-03

組分(fēn)3

2×PAA溶液 超低濃縮膠用

15 ml

4

常溫

RTD6120-04

組分(fēn)4

2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用

30 ml

4

常溫

AP020P

組分(fēn)5

10% APS(幹粉)

5 ml

常溫

常溫

TA0761-01

組分(fēn)6

TEMED

0.5 ml

常溫

常溫

CB010P

組分(fēn)7

10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)

500 ml(幹粉)

常溫

常溫

TP050

組分(fēn)8

2×Tricine 上樣緩沖液(含還(hái)原劑)

1 ml

-20

常溫

RTD6202-02

組分(fēn)9

FastBlue蛋白(bái)染色液

500 ml

常溫

常溫

産品簡介:

本試劑盒含有超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳(多肽電泳)全套試劑,可(kě)以用來(lái)檢測1-20kd的多肽大(dà)小。本試劑盒可(kě)配制至少10塊常規大(dà)小的PAGE膠(8×10cm)。具有以下特點:

1 适用範圍廣:2×多肽電泳緩沖液和2×PAA溶液中不含有SDS,适用于多肽的變性和非變性電泳。

2 分(fēn)辨率高:凝膠緩沖液獨特配方,可(kě)以有效分(fēn)離(lí)1-5kD多肽。

3 穩定性高:凝膠緩沖液pH爲中性,存放(fàng)時間長。

4 使用方便:配制凝膠時隻需1:1混合2×凝膠緩沖液和2×PAA溶液,加上APS和TEMED即可(kě)配制凝膠。

貯存和效期:

按照(zhào)标簽溫度貯存;開封後有效期一年(nián)。

使用說(shuō)明:

. 10% APS配制:

10% APS配制-5 ml将APS幹粉溶于5 ml滅菌水中,徹底溶解後分(fēn)裝,1 ml/支,-20℃備存,每次取一管使用。10% APS應盡量減少常溫存放(fàng)時間,以防失效。10%APS在4℃有效期爲一周,-20℃有效期6個月。若發現凝膠聚合時間延長,應考慮更換使用-20度保存的10% APS。

. 制膠:

I 配制分(fēn)離(lí)膠

1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。

表一  (一塊1 mm mini膠用量)*

 

分(fēn)離(lí)膠

濃縮膠

 

18T /5 ml

5T /2 ml

2×多肽電泳濃縮膠緩沖液

/

1 ml

2×多肽電泳分(fēn)離(lí)膠緩沖液

2.5 ml

/

2×PAA溶液 超低濃縮膠用

/

1 ml

2×PAA溶液 超低分(fēn)離(lí)膠用

2.5 ml

/

10APS

25-50 μl**

20-30 μl

TEMED

2.5-5 μl

2 μl

注: * 如(rú)非必須,不要使用厚度1.5mm的凝膠,盡量使用厚度0.75m和1mm的凝膠,這樣會減少電泳後染色和脫色的時間。

** 凝膠的聚合時間與環境溫度有關。夏天溫度較高時,聚合較快(kuài);冬天氣溫低時,聚合時間會延長。可(kě)以根據表二的标準條件(jiàn)調節催化劑的加入量。

表二 超低凝膠制備凝固時間表

環境溫度

20

25

 

分(fēn)離(lí)膠配制

濃縮膠配制

分(fēn)離(lí)膠配制

濃縮膠配制

分(fēn)離(lí)膠配制量

5 ml

-

5 ml

-

濃縮膠配制量

-

2 ml

-

2 ml

10%APS

50 μl

20 μl

25 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl

2.5 μl

2 μl

凝固時間

5-10 分(fēn)鍾

20-30 分(fēn)鍾

5-10 分(fēn)鍾

20-30 分(fēn)鍾

2.在凝膠模具中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液,然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1-3 cm的無水乙醇層,使凝膠表面保持平整。

3.靜(jìng)置5-10分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

II 配制濃縮膠

去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的水層,用濾紙将殘留的水吸去(qù)。

1.按照(zhào)表一将不同成分(fēn)加入到小燒杯或離(lí)心管中混合;立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。

2.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。

3.靜(jìng)置20-30分(fēn)鍾待凝膠聚合

. 電泳:

1. 10×Tricine-Tris-SDS緩沖液配制:

将10×Tricine-Tris-SDS緩沖液(10×TTS)粉末(Cat NoCB010P)置于一幹淨的一升燒杯中,加入500ml超純水,徹底攪拌混勻,不要調節pH,即配成500ml 10×TTS緩沖液。

表三 1×TTS緩沖液配制

 

1×TTS配制量 500 ml

1×TTS配制量 1000 ml

10×TTS

50 ml

100 ml

超純水

450 ml

900 ml

注:伯樂Mini III電泳槽一次電泳使用500ml 1×TTS緩沖液。

2. 樣品處理(lǐ):

  待上樣的檢測樣品與2×Tricine上樣緩沖液[Cat NoTP050]等體(tǐ)積混合,75℃處理(lǐ)5-10分(fēn)鍾後上樣。蛋白(bái)Marker一般已經含有上樣緩沖液,根據說(shuō)明書(shū)上樣(預染Marker不能加熱(rè)處理(lǐ),非預染Marker上樣前一般要75℃處理(lǐ)5-10分(fēn)鍾)。

将電泳槽的内槽加滿1×TTS緩沖液,輕柔拔出梳子,用1ml移液器将梳孔吹洗幹淨,将Marker或蛋白(bái)樣品(已經過處理(lǐ))加入點樣孔,穩壓電泳(表四),至藍色指示前沿至分(fēn)離(lí)膠下沿位置時即可(kě)停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2.5-3個小時。

表四 多肽電泳條件(jiàn)

恒電壓

150V

起始電流

60-75mA/闆膠

結束電流

15-25mA/闆膠

電泳時間

2.5-3小時

四. 染色(使用組分(fēn)9-FastBlue蛋白(bái)染色液):

用前必讀(dú):

1 使用前如(rú)發現瓶中有少許沉澱,請(qǐng)混勻後使用。

2以下“使用方法”是針對0.75mm1.0 mm厚度,10×10cm凝膠染色程序。

使用方法:

1. 将電泳後的PAGE膠取下放(fàng)入塑料容器中,加入适量染色液(以剛剛覆蓋過膠面爲适),條帶1-2分(fēn)鍾即可(kě)見(jiàn)。

2. 搖床上常溫搖動10-15分(fēn)鍾。

3. 觀察結果。

注意事(shì)項:

1. 使用方法中的各種參數僅針對面積8×10cm或10×10cm,厚度0.75mm和1mm的凝膠,如(rú)果使用更大(dà)面積或更厚的凝膠,請(qǐng)加入更多的染色液并延長染色的時間。

2. 常規染色所需的漂洗,固定,脫色步驟都(dōu)無必要。

3. 本染色液可(kě)以重複利用1-2次,敏感性會有輕微下降,請(qǐng)延長染色時間。

4. 本染色液有輕微腐蝕性,請(qǐng)帶手套操作(zuò)。使用後,請(qǐng)蓋好瓶蓋,常溫密封保存。

 緩沖液配方:

1. 10x Tricine-Tris-SDS緩沖液 (1 L)    (Cat No:CB010P) 

組分(fēn)濃度:1 MTris,1 MTricine, 1% SDS

Tris base 121.1 g

Tricine    179.2 g

SDS         10 g

ddH2O      to1 L 

Do not adjust the pH (~pH 8.3)


2. 2×Tricine蛋白(bái)樣品加樣緩沖液(10ml)  (Cat No:TP050)

組分(fēn)濃度:100 mMTris-HCl, pH 6.8, 24% glycerol, 8% SDS,0.2MDTT,0.02% Coomassie Brilliant Blue G-250

1ml 1MTris-Cl pH6.8

2.4ml 甘油

0.8g  SDS

0.31gDTT

2mg 考馬斯亮藍G-250

用滅菌ddH2O定容至10ml

混勻分(fēn)裝-20℃貯存備用


多肽電泳配套試劑

 


使用該産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:

1. [2016 IF=1.75] Metal-Chelate Affinity Precipitation with Thermo-Responsive Polymer for Purification of ε-Poly-L-Lysine.

ProductRTD6120 超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒

Author: Sipeng Li, Zhaoyang Ding, Jifu Liu, Xuejun Cao.

Journal: Appl Biochem Biotechnol. May 20 2017.

InstitutionEast ChinaUniversity of Science and Technology

Paper link https://link.springer.com/article/10.1007/s12010-017-2495-3

 

2. [2020 IF=2.896] Rapid and sensitive detection of Staphylococcus aureus and Klebsiella pneumonia based on bacitracin-modified Fe3O4@PDA magnetic beads combined with matrix-assisted laser desorption ionization-time of flight mass spectrometry. 

ProductRTD6120 超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒;RTD6110 彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)Marker

Author: Feng Qin,Xiangmin Zhang 

Journal: Analytical Methods 2021,13,2804

Institution Department of Chemistry, Fudan University,

Paper linkhttps://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/34075956/

 

 


 
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