彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)質Marker II(3-40 kD)
Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight
Protein Marker II(3-40 kD)
●産品編号及規格:
RTD6145-01 10 T(50 μl)
RTD6145-02 50 T(250 μl)
● 儲存條件(jiàn):
-20℃保存,有效期12個月
● 産品簡介:
彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)質Marker II可(kě)以直接觀察蛋白(bái)電泳及清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本産品由9種多肽和蛋白(bái)質組成,分(fēn)子量大(dà)小爲 3 kD,4.2 kD,6.5 kD,10 kD(綠色),15 kD,20 kD,25 kD,30 kD,40 kD(紅(hóng)色) (注:蛋白(bái)大(dà)小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預染蛋白(bái)Marker标定過。)。
● 使用說(shuō)明:
第一次收到該産品,常溫融化後,徹底混勻,離(lí)心快(kuài)甩将溶液完全收集到管底。
一. 制膠:
I 配制分(fēn)離(lí)膠
1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的雙蒸水、40% PAA(19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。
2.加入10%APS和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。
3.在凝膠模具中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液,然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1
cm的無水乙醇,使凝膠表面保持平整。
4.靜(jìng)置15-30分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。
表一 (一塊1 mm mini膠用量)
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分(fēn)離(lí)膠
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濃縮膠
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18%T, 5%C /5 ml
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5%T, 3.3%C/2 ml
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40% PAA(19:1)
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2.25 ml
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40% PAA (29:1)
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/
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0.25 ml
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4×凝膠緩沖液
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1.25 ml
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0.5 ml
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乙二醇(電泳級)
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1.5 ml
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/
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ddH2O
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/
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1.25ml
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10%APS
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50 μl
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20 μl
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TEMED
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5 μl
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2 μl
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II 配制濃縮膠
去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的乙醇層,用濾紙将殘留乙醇吸去(qù)。
1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。
2.加入10%過硫酸铵和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。
3.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。
4.靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾裝待凝膠聚合
二. 電泳:
1. 取Marker樣品,充分(fēn)混勻後備用。不要加熱(rè)處理(lǐ)。
2. 電泳前,将10×陽極緩沖液(Cat No:AB080)和10×陰極緩沖液(Cat No:CB010)用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。将電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液,内槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,将Marker或蛋白(bái)樣品(已經過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理(lǐ))加入點樣孔,參考下表進行電泳,至每條帶都(dōu)清晰可(kě)見(jiàn)時停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2-3個小時。
表二 多肽電泳條件(jiàn)
恒電壓
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150V
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起始電流
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60-75mA/闆膠
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結束電流
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15-25mA/闆膠
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電泳時間
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2.5-3小時
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三. 染色
根據常規實驗步驟,用配方6和7(表三)進行染色和觀察。如(rú)果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性,請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白(bái)膠快(kuài)速染色液(Cat No:RTD6201),該産品除具有染色快(kuài),無毒,靈敏性高等特點外,還(hái)能對小肽在染色中起到固定作(zuò)用,不至于小肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離(lí),是常規染色液的理(lǐ)想替代品。
注:預染蛋白(bái)Marker由于嵌合了染料,在不同的凝膠系統中遷移率會有不同,因此隻能用來(lái)粗略估計(jì)目的蛋白(bái)的大(dà)小。如(rú)要精确确定蛋白(bái)的大(dà)小,請(qǐng)在同一凝膠系統中用非預染蛋白(bái)Marker來(lái)标定預染蛋白(bái)Marker的分(fēn)子量。
表三 小分(fēn)子蛋白(bái)質SDS-PAGE電泳試劑配制
1. 40%PAA(29:1)(配制濃縮膠)
貨号: AC2914
丙稀酰胺 38.67g
甲叉雙丙稀酰胺 1.33g
用ddH2O溶解後定容至100
ml,過濾後使用。
貯存:4℃
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2. 40% PAA(19:1) (配制分(fēn)離(lí)膠)
貨号:AC1914
丙稀酰胺 38 g
甲叉雙丙稀酰胺 2 g
用ddH2O溶解後定容至100
ml,過濾後使用。
貯存:4℃
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3. 4×凝膠緩沖液(配制凝膠用)
貨号:GB010
[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]
Tris堿 36.3 g;ddH2O 80ml
0.4
g SDS或4 ml 10% SDS
用HCl調pH值至8.45;用ddH2O定容至100
ml
貯存:4℃
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4. 10×陽極緩沖液(下槽緩沖液)
貨号:AB080
[2
M Tris pH8.9]
Tris堿 121.1g;ddH2O 400ml;用HCl調pH值至8.9;用ddH2O定容至500ml
貯存:4℃
注:使用前稀釋成1×陽極緩沖液使用。
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5. 10×陰極緩沖液(上槽緩沖液)
貨号:CB010
[1
M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]
Tris堿 121.14g;Tricine 179.2g;SDS 10 g
用ddH2O溶解,定容至1000
ml(不用調pH)。
貯存:4℃
注:使用前稀釋成1×陰極緩沖液使用
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6. 染色液
貨号:RTD6203
冰醋酸 100 ml
考馬斯亮藍G-250 0.25 g
水 900 ml
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7. 脫色液
貨号:RTD6204
冰醋酸 100 ml
水 900 ml
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8. 2×Tricine蛋白(bái)樣品上樣緩沖液(10ml)
貨号:TP050
1ml1MTris-HCl pH6.8;2.4
ml 甘油;0.8 g SDS;0.31
g DTT(或者400 μl β-巯基乙醇);2
mg 考馬斯亮藍G-250;用滅菌水定容至10ml
混勻分(fēn)裝-20℃貯存備用
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多肽電泳配套試劑
使用RTD6145 彩虹預染超低分(fēn)子量Marker
II(3-40 kD)産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:
1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for
spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2
Author: Xiaowei
Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao
Zhang, Vijaya Raghavan
Marker: RTD6145
彩虹預染超低分(fēn)子量Marker
II(3-40kD)
Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458
Institution: Nanjing
Agricultural University
Paper link: https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458