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彩虹預染超低分(fēn)子量Marker II(3-40kD)

彩虹預染超低分(fēn)子量Marker II(3-40kD)

産品編号:RTD6145-01

産品規格:10次

相(xiàng)關規格:
數量
價格 ¥300

彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)質Marker II3-40 kD

Rainbow Prestained Ultra Low Molecular Weight Protein Marker II3-40 kD

産品編号及規格:

RTD6145-01   10 T50 μl

RTD6145-02   50 T(250 μl

儲存條件(jiàn):

  -20保存,有效期12個月

産品簡介:

    彩虹預染超低分(fēn)子量蛋白(bái)質Marker II可(kě)以直接觀察蛋白(bái)電泳及清晰判斷Western Blotting的轉膜效果。本産品由9種多肽和蛋白(bái)質組成,分(fēn)子量大(dà)小爲 3 kD4.2 kD6.5 kD,10 kD(綠色),15 kD20 kD25 kD30 kD,40 kD(紅(hóng)色) (注:蛋白(bái)大(dà)小已在18%Tricine-SDS-PAGE中用非預染蛋白(bái)Marker标定過。)


● 使用說(shuō)明:

第一次收到該産品,常溫融化後,徹底混勻,離(lí)心快(kuài)甩将溶液完全收集到管底

. 制膠:

I 配制分(fēn)離(lí)膠

1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的雙蒸水、40% PAA19:1)、凝膠緩沖液和乙二醇加入到小燒杯中混合。

2.加入10%APSTEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。

3.在凝膠模具中迅速灌入适量分(fēn)離(lí)膠溶液,然後在分(fēn)離(lí)膠溶液上輕輕覆蓋一層1 cm的無水乙醇,使凝膠表面保持平整。

4.靜(jìng)置15-30分(fēn)鍾,待分(fēn)離(lí)膠和乙醇層之間出現一個清晰的界面表示凝膠已聚合。

表一  (一塊1 mm mini膠用量)

 

分(fēn)離(lí)膠

濃縮膠

 

18T, 5%C /5 ml

5T, 3.3%C/2 ml

40% PAA19:1

2.25 ml

/

40% PAA (29:1)

/

0.25 ml

4×凝膠緩沖液

1.25 ml

0.5 ml

乙二醇(電泳級)

1.5 ml

/

ddH2O

/

1.25ml

10APS

50 μl

20 μl

TEMED

5 μl

2 μl


II 配制濃縮膠

去(qù)除覆蓋在分(fēn)離(lí)膠上的乙醇層,用濾紙将殘留乙醇吸去(qù)。

1.按照(zhào)表一将不同體(tǐ)積的雙蒸水、40%PAA(29:1)和凝膠緩沖液加入到小燒杯中混合。

2.加入10%過硫酸铵和TEMED,立即混勻5-10秒,以使溶液充分(fēn)混勻。

3.将梳子插入凝膠内,避免産生(shēng)氣泡。

4.靜(jìng)置30-60分(fēn)鍾裝待凝膠聚合

. 電泳:

1. Marker樣品,充分(fēn)混勻後備用。不要加熱(rè)處理(lǐ)。

2. 電泳前,将10×陽極緩沖液(Cat No:AB080)和10×陰極緩沖液(Cat No:CB010)用蒸餾水稀釋成1×緩沖液備用。将電泳槽的外槽加入1×陽極緩沖液,内槽加入1×陰極緩沖液,輕柔拔出梳子,将Marker或蛋白(bái)樣品(已經過2×Tricine上樣緩沖液[Cat No:TP050]處理(lǐ))加入點樣孔,參考下表進行電泳,至每條帶都(dōu)清晰可(kě)見(jiàn)時停止電泳。整個電泳過程大(dà)約需要2-3個小時。

表二 多肽電泳條件(jiàn)

恒電壓

150V

起始電流

60-75mA/闆膠

結束電流

15-25mA/闆膠

電泳時間

2.5-3小時

. 染色

根據常規實驗步驟,用配方6和7(表三)進行染色和觀察。如(rú)果使用配方6進行染色時效果不好或考慮其毒性,請(qǐng)選擇本公司的考馬斯亮藍蛋白(bái)膠快(kuài)速染色液(Cat NoRTD6201,該産品除具有染色快(kuài),無毒,靈敏性高等特點外,還(hái)能對小肽在染色中起到固定作(zuò)用,不至于小肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離(lí),是常規染色液的理(lǐ)想替代品。

注:預染蛋白(bái)Marker由于嵌合了染料,在不同的凝膠系統中遷移率會有不同,因此隻能用來(lái)粗略估計(jì)目的蛋白(bái)的大(dà)小。如(rú)要精确确定蛋白(bái)的大(dà)小,請(qǐng)在同一凝膠系統中用非預染蛋白(bái)Marker來(lái)标定預染蛋白(bái)Marker的分(fēn)子量。

表三 小分(fēn)子蛋白(bái)質SDS-PAGE電泳試劑配制

1. 40%PAA29:1)(配制濃縮膠)   

貨号: AC2914

   丙稀酰胺       38.67g

   甲叉雙丙稀酰胺 1.33g

 ddH2O溶解後定容至100 ml,過濾後使用。

貯存:4

2.  40% PAA19:1 (配制分(fēn)離(lí)膠)

貨号:AC1914

丙稀酰胺      38 g

甲叉雙丙稀酰胺 2 g

ddH2O溶解後定容至100 ml,過濾後使用。

貯存:4

3. 4×凝膠緩沖液(配制凝膠用)

貨号:GB010

[3 M Tris; 0.4% SDS; pH8.45]

Tris 36.3 gddH2O 80ml

0.4 g SDS4 ml 10 SDS

HCl調pH值至8.45ddH2O定容至100 ml

貯存:4

4. 10×陽極緩沖液(下槽緩沖液)

貨号:AB080

[2 M Tris pH8.9]

Tris 121.1gddH2O 400mlHCl調pH值至8.9ddH2O定容至500ml

貯存:4

注:使用前稀釋成陽極緩沖液使用。

5. 10×陰極緩沖液(上槽緩沖液)

貨号:CB010

[1 M Tris; 1 M Tricine ;1% SDS; pH 8.3]

Tris 121.14gTricine 179.2gSDS 10 g

ddH2O溶解,定容至1000 ml(不用調pH)

貯存:4

注:使用前稀釋成陰極緩沖液使用

6. 染色液

貨号:RTD6203

冰醋酸            100 ml

考馬斯亮藍G-250   0.25 g

                900 ml

 

 

7. 脫色液

貨号:RTD6204

冰醋酸  100 ml

      900 ml

 

8.  2×Tricine蛋白(bái)樣品上樣緩沖液(10ml

貨号:TP050

1ml1MTris-HCl pH6.82.4 ml 甘油;0.8 g  SDS0.31 g DTT(或者400 μl β-巯基乙醇);2 mg 考馬斯亮藍G-250用滅菌定容至10ml

混勻分(fēn)裝-20貯存備用

 

 



多肽電泳配套試劑

 


使用RTD6145 彩虹預染超低分(fēn)子量Marker II3-40 kD産品發表部分(fēn)文章(zhāng)列表:

 

1. [2022 IF=13.6] Inactivation mechanism of cold plasma combined with 222 nm ultraviolet for spike protein and its application in disinfecting of SARS-CoV-2

Author: Xiaowei Sheng, Jin Wang, Luling Zhao, Wenjing Yan, Jing Qian, Zhaobin Wang, Jianhao Zhang, Vijaya Raghavan

Marker: RTD6145 彩虹預染超低分(fēn)子量Marker II(3-40kD)

Journal: Journal of Hazardous Materials 465 (2024) 133458

Institution: Nanjing Agricultural University

Paper link https://doi.org/10.1016/j.jhazmat.2024.133458


 
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