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非變性蛋白(bái)電泳Marker轉膜問(wèn)題

news_detail-248.html

非變性電泳蛋白(bái)質Marker（45-880 kD）

Native Electrophoresis Protein Marker（45-880 kD）

●産品編号及規格：

RTD6137   20次 100 μl

●儲存及運輸條件(jiàn)：

-20℃保存，濕冰運輸，有效期爲12個月。

● 産品簡介：

    本産品有4種蛋白(bái)組成，分(fēn)子量範圍爲45-880 kD，經過非變性電泳後，用考馬斯亮藍染色後可(kě)以得(de)到5條主帶。

● 使用說(shuō)明：

1. 取出産品後，常溫融化後，徹底混勻，上樣電泳。

注：上樣量根據膠的厚度和梳子的寬度确定。一般說(shuō)來(lái)，1.0厚度10齒梳子加樣孔上樣5 μl，1.0厚度15齒梳子加樣孔上樣量2.5 μl，其他(tā)規格梳子請(qǐng)适當調整上樣量。

2. 該産品不含蛋白(bái)凝膠制備試劑，您可(kě)以選擇非變性PAGE凝膠制備及電泳試劑盒（貨号：RTD6130）或者蛋白(bái)預制膠（貨号RTD6118）。如(rú)自(zì)備試劑，經典Laemmli系統中把制膠溶液、電泳緩沖液和上樣緩沖液中的SDS和還(hái)原劑（DTT或β-巯基乙醇）全部去(qù)除即可(kě)進行非變性電泳。

3. 電泳條件(jiàn)：

建議(yì)使用8%非變性等度膠或者4-15%非變性梯度膠進行電泳。

4. 電泳結束後，考馬斯亮藍染色，觀察結果。

注：使用銀染染色時，由于靈敏度高于考馬斯亮藍染色方法，需要适當降低Marker上樣量，一般稀釋50倍後上樣。

注意：

1.本蛋白(bái)Marker不适用于變性蛋白(bái)電泳(SDS-PAGE)。
2. 蛋白(bái)非變性電泳條件(jiàn)下，不能精确判斷蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小。因爲在非變性條件(jiàn)下，蛋白(bái)的電荷，空間結構，物化性質等都(dōu)對蛋白(bái)的遷移有影(yǐng)響。
3.非變性蛋白(bái)電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白(bái)的天然結構，都(dōu)沒有偶聯染料，在電泳時基本都(dōu)看(kàn)不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白(bái)中含有鐵離(lí)子，使得(de)電泳後在膠上可(kě)見(jiàn)淡黃(huáng)色，其中440 kD顔色更深。凝膠轉膜後，膜上也可(kě)以看(kàn)到黃(huáng)色的440 kD條帶，可(kě)以大(dà)體(tǐ)判斷Marker轉膜的效果。
4. 非變性Marker轉膜後可(kě)以後用麗春紅(hóng)染色液（貨号：RTD6301）染膜，可(kě)以看(kàn)到Marker條帶，順便可(kě)以檢測轉膜效率，然而要注意的是麗春紅(hóng)染色靈敏度比較低，可(kě)能不能完全看(kàn)到完整的Marker條帶。