非變性蛋白(bái)電泳Marker轉膜問(wèn)題

非變性蛋白(bái)電泳Marker轉膜問(wèn)題

1. 所有的預染蛋白(bái)Marker都(dōu)是變性Marker，不适用于非變性電泳。

2. 蛋白(bái)非變性電泳條件(jiàn)下，不能精确判斷蛋白(bái)的分(fēn)子量大(dà)小。因爲在非變性條件(jiàn)下，蛋白(bái)的電荷，空間結構，物化性質等都(dōu)對蛋白(bái)的遷移有影(yǐng)響。

3. 非變性蛋白(bái)電泳Marker（RTD6137，RTD6142，RTD6144）由于要保持蛋白(bái)的天然結構，都(dōu)沒有偶聯染料，在電泳時基本都(dōu)看(kàn)不到條帶；然而，RTD6137和RTD6144中的440 kD和880 kD由于天然蛋白(bái)中含有鐵離(lí)子，使得(de)電泳後在膠上可(kě)見(jiàn)淡黃(huáng)色，其中440 kD顔色更深。凝膠轉膜後，膜上也可(kě)以看(kàn)到黃(huáng)色的440 kD條帶（下圖），可(kě)以大(dà)體(tǐ)判斷Marker轉膜的效果。

4. 有兩種方法可(kě)以解決非變性Marker轉膜後條帶顯示問(wèn)題：

第一種方法：凝膠轉膜後用麗春紅(hóng)染色液（貨号：RTD6301）染膜，可(kě)以看(kàn)到Marker條帶，順便可(kě)以檢測轉膜效率，然而要注意的是麗春紅(hóng)染色靈敏度比較低，可(kě)能不能完全看(kàn)到完整的Marker條帶。

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第二種方法（下圖）：電泳結束後，把含有Marker泳道的凝膠切下，單獨用考馬斯亮藍染色液染色（貨号：RTD6202），剩餘的凝膠去(qù)完成轉膜到ECL發光(guāng)檢測過程，最後的發光(guāng)結果和Marker染色結果拼接判斷條帶範圍。