高純質粒小提試劑盒（目錄号：RTP2101）
● 試劑盒内容及保存：
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試劑盒組成
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RTP2101-02 （100次）
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RTP2101-03 （200次）
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貯存
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RNase A
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300 μl
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600 μl
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-20℃
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Lysis Dye
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600μl
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2×600μl
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室溫
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溶液P1
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30 ml
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60 ml
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室溫 （加入RNase
A後2-8℃保存）
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溶液P2
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30 ml
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60 ml
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室溫
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溶液P3
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40 ml
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80 ml
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室溫
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去(qù)蛋白(bái)液PD
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60 ml
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120 ml
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室溫
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漂洗液PW
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25 ml
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2×25
ml
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室溫
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洗脫緩沖液EB
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15 ml
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15 ml
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室溫
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質粒吸附柱CP
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100個
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2×100個
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室溫
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收集管（2 ml）
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100個
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2×100個
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室溫
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說(shuō)明書(shū)
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1份
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1份
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● 儲存條件(jiàn)和效期：
本試劑盒在室溫（25℃左右）幹燥條件(jiàn)下，可(kě)保存1年(nián)；更長時間的保存可(kě)置于2–8℃。2–8℃保存條件(jiàn)下，若溶液産生(shēng)沉澱，應在使用前置于37℃下溶解沉澱至溶液澄清後再使用。單獨包裝的RNase A 在-20℃可(kě)穩定保存1年(nián)以上。加入RNase A後的溶液P1應置于2–8℃保存，可(kě)穩定保存半年(nián)。
● 産品簡介及使用說(shuō)明：
本試劑盒采用經典的堿裂解法裂解細菌，再通過離(lí)心吸附柱在高鹽狀态下特異性地結合DNA的特性，可(kě)以從(cóng)1–5ml大(dà)腸杆菌LB培養液中快(kuài)速提取3–20μg純淨的高拷貝質粒DNA。提取的質粒可(kě)适用于各種常規操作(zuò)，包括酶切、PCR、測序、連接和轉化等實驗。然而，對質粒純度要求更高的轉染實驗（要求無内毒素），此試劑盒不能達到要求。另外，盡管該試劑盒可(kě)以抽提較大(dà)的質粒（>10kb），但(dàn)我們不推薦使用。如(rú)果一定要使用，請(qǐng)參考以下方法：加大(dà)菌體(tǐ)使用量（使用5–10 ml過夜培養物），同時按照(zhào)比例增加P1、P2、P3的用量；洗脫緩沖液應在70℃預熱(rè)，在吸附和洗脫時可(kě)以适當的延長時間，以增加提取效率，其它步驟相(xiàng)同。
● 産品特點：
1使用了Lysis Dye，菌體(tǐ)裂解是否完全一目了然。由于判斷菌體(tǐ)裂解和中和是否徹底更主要取決于操作(zuò)者的經驗，所以我們增加了Lysis Dye（一種能使裂解/中和體(tǐ)系變換顔色的試劑）來(lái)幫助觀察裂解/中和的程度。加入P1後，Lysis Dye使菌液變爲渾濁的紅(hóng)色；加入P2後，Lysis Dye立即使溶液變爲澄清的紅(hóng)色，裂解是否完全隻要觀察紅(hóng)色溶液是否澄清，如(rú)果紅(hóng)色非常均一，表明裂解充分(fēn)；在完全裂解的體(tǐ)系中加入P3混勻後，體(tǐ)系立即變爲黃(huáng)色，任何紅(hóng)色的殘留表明沒有完全混勻或者中和不徹底。
2 增加了去(qù)蛋白(bái)液PD，能更加徹底地去(qù)除蛋白(bái)污染，得(de)到純度更高的質粒。
● 準備工(gōng)作(zuò)：
1 将試劑盒附帶的RNase A全部加入到溶液P1中（如(rú)15ml P1中加入150μl RNase A），混勻後4℃貯存。
2 按照(zhào)标簽所示在漂洗液PW中加入無水乙醇，混勻後蓋緊瓶蓋後室溫貯存備用。
3 每次使用前請(qǐng)檢查溶液P2，溶液P3和去(qù)蛋白(bái)液PD是否有沉澱生(shēng)成，如(rú)果出現沉澱，37℃溫浴至沉澱溶解後再使用。
● 使用Lysis Dye的标準操作(zuò)步驟：
如(rú)非指出，所有離(lí)心步驟均爲使用台式離(lí)心機(jī)在室溫下離(lí)心。
1． 取1–5 ml過夜培養的菌液加入離(lí)心管中，10,000g 離(lí)心1分(fēn)鍾，盡量吸除上清。
注：菌液較多時可(kě)以通過幾次離(lí)心将菌體(tǐ)沉澱收集到一個離(lí)心管中。
2． 向菌體(tǐ)沉澱的離(lí)心管中加入250 μl溶液P1（請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA）和5μl Lysis Dye，使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉澱，此時溶液爲渾濁的紅(hóng)色。
注：如(rú)果有未徹底混勻的菌塊，會影(yǐng)響裂解，導緻提取量和純度偏低。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6–8次使菌體(tǐ)充分(fēn)裂解，此時溶液變爲澄清的紅(hóng)色。
注：溫和地混合，不要劇(jù)烈震蕩，以免污染基因組DNA；所用時間絕對不應超過5分(fēn)鍾 ，以免質粒受到破壞；紅(hóng)色溶液應該透明均一，如(rú)有渾濁紅(hóng)色顆粒，表明裂解不充分(fēn)，會大(dà)大(dà)降低質粒提取效率。
4． 加入350 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉，充分(fēn)混勻，混勻充分(fēn)的标志是溶液完全呈透明的黃(huáng)色，如(rú)有可(kě)見(jiàn)紅(hóng)色，說(shuō)明混勻不徹底。10,000g 離(lí)心10分(fēn)鍾。
注：P3加入後應立即混合，避免産生(shēng)局部沉澱。
左側未完全混勻，有紅(hóng)色；右側完全混勻，呈均勻黃(huáng)色
5． 小心地将上清轉移到吸附柱CP中（吸附柱放(fàng)入收集管中），10,000g離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
6．向吸附柱CP中加入500 μl去(qù)蛋白(bái)液PD，10,000g離(lí)心30秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
7． 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），10,000g 離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
8. 向吸附柱CP中加入500 μl漂洗液PW，10,000g 離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液。
9. 将吸附柱CP置于重新放(fàng)回收集管中，10,000g 離(lí)心2分(fēn)鍾。
注：此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去(qù)除，絕對不可(kě)省略，因爲漂洗液中乙醇的殘留會影(yǐng)響後續實驗（酶切，PCR等）。
10. 将吸附柱CP置于一個幹淨的1.5ml離(lí)心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100 μl洗脫緩沖液EB，室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾，10,000g 離(lí)心2分(fēn)鍾将質粒溶液收集到離(lí)心管中，-20℃保存。
注：● 爲了增加質粒的回收效率，可(kě)将得(de)到的洗脫液重新加入離(lí)心吸附柱中，再次離(lí)心收集。
● 洗脫緩沖液體(tǐ)積不應少于50
μl，體(tǐ)積過小影(yǐng)響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内，pH值低于7.0會降低
洗脫效率。
●不使用Lysis Dye的标準操作(zuò)步驟：
如(rú)非指出，所有離(lí)心步驟均爲使用台式離(lí)心機(jī)在室溫下離(lí)心。
1． 取1–5 ml過夜培養的菌液加入離(lí)心管中，10,000
g離(lí)心1分(fēn)鍾，盡量吸除上清。
注：菌液較多時可(kě)以通過幾次離(lí)心将菌體(tǐ)沉澱收集到一個離(lí)心管中。
2． 向菌體(tǐ)沉澱的離(lí)心管中加入250 μl溶液P1（請(qǐng)先檢查是否已加入RNaseA），使用移液器或渦旋振蕩器徹底懸浮細菌細胞沉澱。
注：如(rú)果有未徹底混勻的菌塊，會影(yǐng)響裂解，導緻提取量和純度偏低。
3． 加入250 μl溶液P2，溫和地上下翻轉6–8次使菌體(tǐ)充分(fēn)裂解。
注：溫和地混合，不要劇(jù)烈震蕩，以免污染基因組DNA；所用時間絕對不應超過5分(fēn)鍾，以免質粒受到破壞。
4． 加入350 μl溶液P3，立即溫和地上下翻轉6–8次，充分(fēn)混勻，此時會出現白(bái)色絮狀沉澱。10,000g 離(lí)心10分(fēn)鍾。
注：P3加入後應立即混合，避免産生(shēng)局部沉澱。如(rú)果上清中還(hái)有微小白(bái)色沉澱，可(kě)再次離(lí)心後取上清。
5． 小心地将上清轉移到吸附柱CP中（吸附柱放(fàng)入收集管中），10,000g 離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
6．向吸附柱CP中加入500 μl去(qù)蛋白(bái)液PD，10,000g離(lí)心30秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
7． 向吸附柱CP中加入700 μl漂洗液PW（請(qǐng)先檢查是否已加入無水乙醇），10,000g 離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液，将吸附柱CP重新放(fàng)回收集管中。
7 向吸附柱CP中加入500
μl漂洗液PW，10,000g 離(lí)心30–60秒，倒掉收集管中的廢液。
8. 将吸附柱CP置于收集管中，10,000g 離(lí)心2分(fēn)鍾。
注：此步驟目的是将吸附柱中殘餘的漂洗液去(qù)除，絕對不可(kě)省略，因爲漂洗液中乙醇的殘留會影(yǐng)響後續實驗（酶切，PCR等）。
9． 将吸附柱CP置于一個幹淨的1.5ml離(lí)心管中，向吸附膜的中央部位懸空滴加50–100
μl洗脫緩沖液EB，室溫放(fàng)置2分(fēn)鍾，10,000g離(lí)心2分(fēn)鍾将質粒溶液收集到離(lí)心管中，-20℃保存。
注：● 爲了增加質粒的回收效率，可(kě)将得(de)到的洗脫液重新加入離(lí)心吸附柱中，再次離(lí)心收集。
● 洗脫緩沖液體(tǐ)積不應少于50 μl，體(tǐ)積過小影(yǐng)響回收效率。
● 洗脫液的pH值對于洗脫效率有很大(dà)影(yǐng)響。若用水做洗脫液應保證其pH值在7.0-8.5範圍内，pH值低于7.0會降低洗脫效率。
質粒提取試劑盒 RTP2101/RTP2102發表文章(zhāng)
1. A weird DNA band in PCR and its cause.
Author: Chang Shenghe, Sun Wei, Zhou Zhaoxi, Li Jingyang, Dai Minjie, Shu Haiyan
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Journal of Plant Science & Molecular
Breeding Volume 5 Article 2 2016
Institution：Haikou
experimental station, Chinese Academy of Tropical Agricultural Sciences
Paper link：https://doi.org/10.7243/2050-2389-5-2
2. [2017 IF=4.076] Application of Real-Time Quantitative PCR
to Detect Mink Circovirus in Naturally and Experimentally Infected Minks.
Author: Xingyang Cui, Yunjia Shi, Lili Zhao, Shanshan Gu, Chengwei Wei, Yan
Yang,Shanshan Wen, Hongyan Chen and Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Fronties in Microbiology May 2018 | Volume 9 | Article 937
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/29867846
3. [2018 IF=8.063] ATF4 destabilizes RET through nonclassical
GRP78 inhibition to enhance chemosensitivity to bortezomib in human
osteosarcoma
Author: Jie Luo, Yuanzheng Xia, Yong Yin, Jun Luo, Mingming Liu, Hao Zhang, Chao
Zhang, Yucheng Zhao, Lei Yang, and Lingyi Kong
Product: RTP2101 高純質粒小提試劑盒
Journal: Theranostics 2019, Vol. 9, Issue 21
Institution：School of
Traditional Chinese Pharmacy, China Pharmaceutical University
Paper link：https://pubmed.ncbi.nlm.nih.gov/31534554
4. [2020 IF=1.336] Isopentenyl Diphosphate Isomerase (IPI)
Gene Silencing Negatively Afects Patchouli Alcohol Biosynthesis
in Pogostemon cablin
Author: Wuping Yan,Yuzhang Yang,Yougen Wu,Jing Yu,Junfeng Zhang,
Dongmei Yang, Zeeshan Ul Haq Muhammad
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Plant Molecular Biology Reporter Published 27 January 2021
Institution：College
of Horticulture, Hainan University
Paper link：https://link.springer.com/article/10.1007/s11105-020-01269-0
5. [2022 IF=2] Genomic characterization and phylogenetic
analysis of Aleutian mink disease virus identified in a sudden death mink case
Author: Xingyang Cui, Yan Yang, Fang Wang, Jilong Luo, Ping Zhang, Hongyan Chen,
Lili Zhao, Junwei Ge
Product: RTP2102 普通質粒小提試劑盒
Journal: Comparative Immunology, Microbiology
and Infectious Diseases. Vo101, October 2023, 102052
Institution：College of
Veterinary Medicine, Northeast Agricultural University
Paper link：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0147957123001108