Tricine多肽電泳參考文獻

何時使用Tricine-SDS-PAGE檢測小分(fēn)子肽？

如(rú)果你(nǐ)感興趣的蛋白(bái)小于20KD，你(nǐ)就(jiù)要使用Tricine-SDS-PAG系統來(lái)分(fēn)離(lí)小肽了。Tricine-SDS-PAGE系統是可(kě)以分(fēn)離(lí)1-100KD的蛋白(bái)質。此系統最适合分(fēn)離(lí)低于30KD的蛋白(bái)質。

相(xiàng)關産品：超低分(fēn)子量蛋白(bái)電泳試劑盒（貨号：RTD6120）

Tricine-SDS-PAGE與傳統SDS-PAGE的區别：

1 分(fēn)離(lí)膠中更高的Tris濃度：終濃度爲0.75M；普通SDS-PAGE爲0.375M

2 分(fēn)離(lí)膠和濃縮膠中的pH都(dōu)是8.45

小肽的電泳：

1 關于陰極緩沖液和陽極緩沖液：

Tricine-SDS-PAGE系統不同于常規的SDS-PAGE，使用兩種緩沖液電泳。電泳槽内槽是1×陰極緩沖液，含有Tricine和SDS。外槽是1×陽極緩沖液，是0.2M Tris。由于電泳槽内外槽緩沖液不一樣，電泳前要檢測電泳槽是否漏液，如(rú)果漏液的話(huà)将導緻内外槽緩沖液混合，導緻電泳結果不好。如(rú)果發現内槽緩沖液漏液，可(kě)以将外槽緩沖液加滿到和内槽緩沖液齊平。

2 關于電泳時的電壓：

濃縮膠一般用穩壓80-100V，如(rú)果使用新鮮的緩沖液，這時的電流應該在20mA左右，如(rú)果電流太小，請(qǐng)檢查緩沖液以及電泳設備是否有問(wèn)題。當指示前沿至濃縮膠和分(fēn)離(lí)膠交界時，電壓可(kě)以調高到120-150V。整個電泳時間約需2-3小時。

3 關于電泳的指示前沿：

由于溴酚藍在Tricine-SDS-PAGE系統中泳動很快(kuài)，很快(kuài)就(jiù)跑到緩沖液中去(qù)了。超低分(fēn)子量蛋白(bái)Marker和2×Tricine 上樣緩沖液中的指示前沿是考馬斯亮藍G-250。電泳中隻要指示前沿跑不丢，小肽就(jiù)不會跑丢。然而，考馬斯亮藍G-250作(zuò)爲指示前沿的缺點是在分(fēn)離(lí)膠中比較彌散。如(rú)果電泳時間較短(duǎn)，染色時會遮擋3KD左右的小肽。

4 小肽的染色：

由于小肽還(hái)有較少的氨基酸，染色時結合的染料就(jiù)少，導緻染色靈敏度比較低。上樣時要加大(dà)上樣量。另外，低于5KD的小提容易從(cóng)PAGE膠上脫離(lí)，染色前最好有個固定步驟(0.5％戊二醛，30%乙醇)。爲了更好的染色小肽，可(kě)以選擇FastBlue蛋白(bái)染色液（Cat No：RTD6202），該産品除具有染色快(kuài)，無毒，靈敏性高等特點外，還(hái)能對小肽在染色中起到固定作(zuò)用，不至于小肽在染色和脫色中從(cóng)凝膠中脫離(lí)，是常規染色液的理(lǐ)想替代品。

 小肽的轉膜/Western Blot實驗

由于小肽比較小，轉膜時要注意小肽非常容易透過PVDF膜。兩種方法可(kě)以解決這一問(wèn)題：兩張PVDF膜重疊在一起；縮短(duǎn)轉膜時間（半幹法轉移，200mA 15-20分(fēn)鍾就(jiù)可(kě)以了）。轉膜使用0.22 μm的PVDF膜。濕轉（轉膜緩沖液加20%甲醇，不加或少加SDS，200mA 30-35分(fēn)鍾）。

 小肽電泳文獻：

1 Schagger, H. & von Jagow, G. Tricine–sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis for the separation of proteins in the range from 1–100 kDalton. Anal. Biochem. 166, 368–379 (1987). PDF下載

最原始小肽電泳的文獻。

2 Schagger, H. Tricine–SDS-PAGE. Nature Protocols. 1,16-23，2006  PDF下載

87年(nián)的作(zuò)者Schagger在Nature Protocols 開刊文章(zhāng)，寫的精細，值得(de)推薦。

3 兩篇國(guó)内文獻，主要討(tǎo)論尿素的作(zuò)用。

多肽的電泳分(fēn)離(lí) 2004

有效分(fēn)離(lí)1kDa小肽的Tricine-SDS-PAGE方法 2004