BN電泳介紹及參考文獻

溫和膠，簡寫爲BN-PAGE（Blue Native PAGE），由Sch?gger等建立的一種電泳系統，最初被用來(lái)分(fēn)離(lí)牛心髒組織中線粒體(tǐ)上的蛋白(bái)質複合體(tǐ)。由于在研究蛋白(bái)複合體(tǐ)上的優勢，BN-PAGE被用于線粒體(tǐ)膜、類囊體(tǐ)膜、質膜等膜蛋白(bái)複合體(tǐ)的研究。在做植物類囊體(tǐ)膜的電泳時，結合葉綠素的蛋白(bái)質複合物呈綠色，而不含葉綠素的呈藍色，因此又稱之爲藍綠溫和膠電泳。

Blue Native PAGE是最古老的Native-PAGE技術(shù)。在電泳緩沖液和上樣緩沖液中加入了考馬斯亮藍G-250，蛋白(bái)質表面結合了大(dà)量的考馬斯亮藍染料而帶上負電荷，這會導緻即使堿性蛋白(bái)（pI高于7的蛋白(bái)）也會向陰極遷移。

Blue Native PAGE在分(fēn)析蛋白(bái)質-蛋白(bái)質相(xiàng)互作(zuò)用以及膜蛋白(bái)複合物方面有很大(dà)的優勢，其分(fēn)離(lí)範圍在100KDa-10MDa。這種方法的缺點是：考馬斯亮藍與蛋白(bái)的結合起到了去(qù)垢劑的作(zuò)用，可(kě)能導緻複合物的分(fēn)離(lí)；并對化學發光(guāng)或蛋白(bái)質輔基的熒光(guāng)或熒光(guāng)染料的标記具有潛在的猝滅作(zuò)用。

Clear Native PAGE是另外一種電泳技術(shù)，這是BN-PAGE之後出現的一種技術(shù)。可(kě)以分(fēn)離(lí)聚丙烯酰胺凝膠（PI小于7）中的酸性水溶性蛋白(bái)和膜蛋白(bái)。分(fēn)辨率通常低于BN-PAGE。但(dàn)是，當考馬斯亮藍G-250染料妨礙進一步分(fēn)析時，CN-PAGE具有優勢。例如(rú)，爲了測量催化活性（例如(rú)線粒體(tǐ)ATP合酶）或分(fēn)離(lí)痕量的膜蛋白(bái)以進行熒光(guāng)共振能量分(fēn)析，CN-PAGE比BN-PAGE更溫和。 CN-PAGE可(kě)以維持膜蛋白(bái)的超分(fēn)子組裝，而BN-PAGE的結構會引起分(fēn)解。可(kě)以通過CN-PAGE檢測線粒體(tǐ)ATPase中具有酶促活性的寡聚體(tǐ)，但(dàn)使用BN-PAGE則不能檢測。由于CN-PAGE中沒有帶電的染料，因此蛋白(bái)質在電場中的遷移完全取決于蛋白(bái)質的固有電荷，等電點低于7的酸性蛋白(bái)才能帶上負電荷正常電泳。優點是條件(jiàn)相(xiàng)對溫和，在蛋白(bái)質組學研究中具有很大(dà)的優勢。 BN-PAGE和CN-PAGE的制膠緩沖液與電泳條件(jiàn)相(xiàng)同，但(dàn)是CN-PAGE的陰極緩沖液（内槽緩沖液）不含考馬斯染料，但(dàn)将0.025％的洋地黃(huáng)皂苷添加到了凝膠中。

1 Blue native PAGE

Hermann Schagger在Nature Protocol上的經典方法。凝膠緩沖液使用咪唑配方。

2 Blue Native electrophoresis to study mitochondrial and other protein complexes

凝膠緩沖液使用Bis-Tris配方。

相(xiàng)關産品：RTD6139-0312 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型闆3-12%預制膠，通用型)

          RTD6139-0420 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(U型闆4-16%預制膠，通用型)
3 Advantages and limitations of clear-native PAGE

Hermann Schagger CN-PAGE的優缺點

4 BN系統非梯度凝膠（手灌膠） Non-Gradient Blue Native Polyacrylamide Gel Electrophoresis
相(xiàng)關産品：RTD6140 Blue/Clear 非變性凝膠電泳試劑盒(手灌膠)

BN電泳在更換爲無色電泳緩沖液後，電流基本在2-5mA，有些電泳電源如(rú)伯樂電源有負載檢查功能，電流過低（低于4mA） 會認爲沒有負載，報錯E1錯誤代碼，終止電泳。解決方法是更換電泳電源，如(rú)使用國(guó)産電源；另外可(kě)以調高電壓高于300V，使得(de)電流不要低于4mA。