Anti-PCNA抗體(tǐ)（鼠單抗）

Anti-PCNA Antibody（Monoclonal Antibody from Mouse）

● 産品簡介

增殖細胞核抗原（Proliferating Cell Nuclear Antigen，PCNA）由Miyachi等于1978年(nián)在 SLE（系統性紅(hóng)斑狼瘡）患者的血清中首次發現并命名，因其隻存在于正常增殖細胞及腫瘤細胞内而得(de)名，以後的研究發現PCNA與細胞DNA合成關系密切，在細胞增殖的啓動上起重要作(zuò)用，是反映細胞增殖狀态的良好指标。PCNA是一種分(fēn)子量爲36 kD的蛋白(bái)質，在細胞核内合成，并存在于細胞核内，爲DNA聚合酶δ的輔助蛋白(bái)，該蛋白(bái)對聚合酶的持續合成能力起重要作(zuò)用。在細胞核内存在可(kě)溶性與不溶性兩種PCNA，可(kě)溶性PCNA在細胞周期各期中均有表達，其量在DNA合成過程中不發生(shēng)明顯變化，易被去(qù)污劑提取、甲醇破壞；不溶性PCNA較穩定，不易被去(qù)污劑洗脫、甲醇破壞，這種PCNA在G0～G1期細胞中無明顯表達，G1晚期，其表達大(dà)幅度增加，S期達到高峰，G2～M期明顯下降，其量的變化與DNA合成一緻，檢測其在細胞中的表達，可(kě)作(zuò)爲評價細胞增殖狀态的一個指标。

注：WB, Western blot; IP, Immunoprecipitation; IF, Immunofluorescence

本抗體(tǐ)如(rú)果用于常規的Western檢測，至少可(kě)以檢測50次。

● 貯存形式：

穩定溶液，1 mg/ml抗體(tǐ)溶于PBS，50%甘油，pH7.2。

● 保存及運輸條件(jiàn)：

-20℃保存，一年(nián)有效；避免反複凍融；濕冰運輸。

● 使用說(shuō)明：

1. Western Blot雜交(ECL顯色)：1:2000-5000稀釋，常溫孵育1-2 h或4℃過夜。

2. 免疫熒光(guāng)（IF）和免疫組化（IHC）：1:200-1000稀釋。

● 實驗示例：

                    1           2         3         4           5

lane 1，5：ECL Marker；lane 2：總蛋白(bái)TP；lane 3：細胞漿蛋白(bái)，C-Pr；lane 4：細胞核蛋白(bái)，N-Pr

 Jurkat蛋白(bái)提取：總蛋用RIPA（貨号：RL1020 ）提取。胞漿蛋白(bái)和核蛋白(bái)用動物細胞核蛋白(bái)與細胞漿蛋白(bái)抽提試劑盒（貨号：RTD8301）提取。

 制膠和電泳：RealPAGE plus彩色凝膠快(kuài)速制備試劑盒（貨号：RTD6132-15）；200 V 55 min

 轉膜：NC膜，1×RealBlot快(kuài)速轉膜液 400 mA 37 min

 封閉：Western無蛋白(bái)快(kuài)速封閉液（貨号：PF1070） RT封閉 20 min

 一抗： Anti-PCNA抗體(tǐ)（鼠單抗）（貨号：APM5012） 1：5000

 二抗：HRP标記羊抗鼠IgG（貨号：HGM1060）1：5000

 ECL發光(guāng)：RealECL發光(guāng)液（貨号：EC2520）；化學發光(guāng)成像系統（貨号：RT523）拍(pāi)照(zhào)。